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Tween20在线播放_tween20作用(2024年11月免费观看)

内容来源：乐园影视所属栏目：导读更新日期：2024-11-28

Tween20

𐟧ꔂST缓冲液配置指南 𐟔씂ST缓冲液，用于免疫印迹等实验，由Tris缓冲液、氯化钠和Tween-20组成。 𐟓配方（1X浓度）： - 10X PBS缓冲液（pH 7.4）：含1.37 M NaCl, 27 mM KCl, 100 mM Tris。 - Tween-20：0.1%（v/v），即1L 1X PBS中加1mL Tween-20。 - 蒸馏水：至1L。 𐟔쥈𖥤‡步骤： 1️⃣ 取无菌容器，加入1L 10X PBS。 2️⃣ 用蒸馏水稀释至1X，并搅拌均匀。 3️⃣ 加入0.1% Tween-20，继续搅拌至均匀。 4️⃣ 过滤或离心缓冲液，去除颗粒。 5️⃣ 分装至无菌瓶，避免冻融，室温或4℃保存。 𐟒ᥰ贴士：制备好的TBST缓冲液应尽快使用，以确保最佳效果。

𐟧ꐂST缓冲液配置全攻略✨ 𐟔 你是否正在寻找PBST缓冲液的配置方法？这种强大的洗涤缓冲液是免疫印迹实验等科研工作的得力助手！它融合了磷酸缓冲液（PBS）与氯化钠（NaCl），还添加了表面活性剂Tween-20，让实验结果更清晰。 𐟓 配方来啦（1X浓度）： - 10X PBS缓冲液（pH 7.4）：包含1.37 M NaCl, 27 mM KCl, 100 mM Na2HPO4, 18 mM KH2PO4，记得将10倍浓缩的PBS缓冲液稀释为1X哦！ - Tween-20：0.1%（体积/体积比例），就是在1L的1X PBS里加上1mL Tween-20。 - 蒸馏水：加到1L就搞定啦！ 𐟑颀𐟔젩…置步骤来啦： 1️⃣ 取个无菌容器，放入1L的10X PBS缓冲液。 2️⃣ 用蒸馏水把10X PBS稀释到1X，然后搅和搅和。 3️⃣ 撒点Tween-20进去，继续搅，直到均匀混合。 4️⃣ 用过滤或离心的方法，把做好的PBST缓冲液里的颗粒或杂质都去掉。 5️⃣ 最后，把缓冲液分装到小瓶子里，别让它反复冻融，放在室温下或者4摄氏度的阴凉地方就好啦！ 𐟎‰ 完成啦！现在你有了一瓶新鲜的PBST缓冲液，快去试试吧！

吐温20：非离子型表面活性剂的应用吐温20，也被称为Tween-20或Polyethylene glycol sorbitan monolaurate，是一种非离子型表面活性剂。这种试剂在Western blot（WB）实验中非常常见，通常添加在洗膜液PBS或TBS中。吐温20的主要作用是通过降低溶液的表面张力，使得抗体更容易扩散并结合到膜上的目标蛋白。此外，它还能减少非特异性结合，从而提高检测的特异性和信噪比。在WB洗液中，吐温20的作用与BSA相似，都是为了对抗原抗体蛋白提供保护作用。作为表面活性剂，吐温20能够减少抗体对抗原的非特异性作用，用于洗脱未结合的抗体、减少非特异性结合。

BST不宜高压灭菌：防止吐温20起昙现象的有效方法 TBST（Tris-Buffered Saline with Tween 20）是一种常用的生物化学缓冲液，在Western blot等实验中用于洗涤膜上的非特异性结合物质。 TBST中含有Tween 20，这是一种非离子型表面活性剂，具有增溶和乳化的作用。然而，Tween 20在高压灭菌过程中可能会出现起昙现象，这是由于Tween 20中的疏水基团与水分子之间的氢键缔合在高温下被破坏，导致相分离。这种现象可能会影响TBST的性能和使用效果。为了防止Tween 20在TBST中起昙，可以采取以下有效方法： 1.过滤除菌：使用0.22微米的微孔滤膜对TBST进行过滤除菌。这种方法可以避免高温对Tween 20的影响，同时保证TBST的无菌状态。需要注意的是，Tween 20本身比较粘稠，高浓度时可能不好过滤。因此，在过滤前可以将TBST适当稀释，以降低Tween 20的浓度，提高过滤效率。 2.无菌操作：在配制和使用TBST时，严格遵守无菌操作规程，避免污染。使用无菌的容器和器具，确保整个操作过程的无菌性。 3.避免高温处理：尽可能避免对TBST进行高温处理，如高压灭菌等。如果确实需要对TBST进行灭菌处理，可以考虑使用其他非高温的灭菌方法，如紫外线灭菌或化学灭菌（但需注意化学灭菌剂对TBST成分的影响）。 4.质量控制：在配制TBST时，严格控制各成分的比例和浓度，确保TBST的质量和稳定性。定期对TBST进行质量检测，包括无菌检测、pH值检测等，以确保其符合使用要求。综上所述，为了防止Tween 20在TBST中起昙，建议采用过滤除菌的方法对TBST进行灭菌处理。同时，在配制和使用过程中严格遵守无菌操作规程，避免高温处理，并进行质量控制以确保TBST的质量和稳定性。这些方法可以有效防止Tween 20的起昙现象，保证TBST在生物化学实验中的正常使用效果。 #广州华韵生物科技有限公司#

免疫沉淀实验常见问题及解决方案𐟧ꊥ…疫沉淀(IP)是一种用于纯化和富集目标蛋白的技术，在蛋白质组学研究中常用于识别蛋白质与蛋白质之间的相互作用。以下是免疫沉淀实验中常见的一些问题及其解决方案，希望对大家的实验有所帮助。 𐟌Ÿ背景高样本中有不溶蛋白残留：离心后应立即取出上清。洗涤不充分：优化洗涤缓冲液，通过加入去垢剂（如0.5-1% NP-40/Triton X-100/Tween-20）或增加盐离子浓度（如250mM NaCl/1-2mM DTT/ME），增加洗涤时间和次数来提高洗杂效率。非特异蛋白与磁珠结合：磁珠用BSA预封闭不充分，确保BSA新鲜，将磁珠和1% BSA孵育1小时，使用前PBS洗涤3-4次。抗体特异性不好：使用亲和纯化的抗体。抗体用量太多：尝试使用更少的抗体。裂解液中蛋白含量太高：减少样本用量。蛋白和抗体非特异结合：在免疫沉淀之前预先将磁珠和样本孵育，清理样本中可以和磁珠结合的成分，一些研究人员也使用同型对照来预清理裂解液。 𐟌Ÿ没有检测到目的蛋白洗脱样本中目的蛋白不表达或低水平表达：如果表达水平低，需要增加裂解液用量，但也可能导致非特异结合的增加，所以在免疫沉淀之前需要预先清除裂解液。抗体用量不够：检查抗体用量，提高使用量。目标蛋白没有从磁珠上洗脱：需要确保使用的洗脱缓冲液正确。抗体没有结合磁珠：确保使用的磁珠和抗体亚型匹配，磁珠正确保存，防止变质或干燥。裂解液中盐碱度太高：改用低盐碱度裂解液，一般可选NP-40, RIPA, western及IP细胞裂解液。 𐟌Ÿ加样顺序对靶蛋白得率的影响磁珠、抗体、抗原样本混合一起孵育：速度最快，但靶蛋白纯度和得率会很低。间接法：抗体和抗原样本先结合，再加入磁珠孵育，靶蛋白得率最高。直接法：磁珠先和抗体结合，再加入抗原孵育，对于表达丰度高的蛋白，两种方法差别不大，如果表达丰度低，要选择间接法获得更高的靶蛋白得率。希望这些小知识能帮助你更好地进行免疫沉淀实验！𐟧ꀀ

GST下拉实验，一文搞定！ 𐟔젇ST pull-down实验的详细步骤和注意事项来啦！快来看看吧！ 1️⃣ 融合表达GST标签的融合蛋白首先，你需要选择一个合适的表达载体，比如pGEX-4T-1，来融合表达GST标签的蛋白。载体的选择要考虑表达量、是否可诱导等因素。 2️⃣ 诱导表达的温度和时间诱导表达时，温度和时间非常重要。温度过高可能导致蛋白形成包涵体，影响后续实验。建议摸索一个合适的诱导温度，通常在16℃~25℃之间。诱导时间也要适中，过长可能导致诱导剂不被代谢，影响蛋白表达。 3️⃣ GST-pull down的对照设置在做SDS-PAGE时，点一个input的蛋白（如B-6＊His）作为阳性对照，检查Western操作中的试剂和步骤是否有问题。谷胱甘肽琼脂珠上只固定GST蛋白，inputB-6*His，用于做阴性对照，检查GST是否与input的蛋白相互作用。 𐟔 实验常见问题与解答 1️⃣ 如何减少GST下拉实验中的假阳性结果？假阳性结果可能是由于自发形成的聚集态、不特异的吸附和其他非特异性相互作用引起的。可以通过添加更多的非离子型洗涤剂、使用特定的pH缓冲液来消除这些非特异性的互作。在检测前，用0.1％的Tween-20（或其他洗涤剂）处理GST-beads。 2️⃣ 如何选择适合的阴性对照组？阴性对照组选用不含目的蛋白的空GST蛋白，这样可以帮助评估GST beads的特异性并排除一些假阳性的结果。 3️⃣ GST-pull down实验的温度和时间选择全程实验温度通常为4℃，可缓解样品中蛋白降解的情况。时间为2-4小时。但在不同实验情况下，这些参数可能需调整。

𐟔 解决His标签蛋白纯化杂带问题 𐟒ᠥ‘现His标签蛋白纯化跑胶有杂带？别担心，这里有解决方案！ 1️⃣ 如果His标签蛋白被部分降解，试试添加蛋白酶抑制剂（避免使用EDTA），保持低温操作，并缩短样品处理时间。 2️⃣ 在结合缓冲液中加入低浓度咪唑，如20-40mM，减少杂质与柱子的结合。 3️⃣ 若杂质与目的蛋白有相互作用，可在细胞破碎前加入去垢剂或还原剂，或在Wash buffer中提高去垢剂浓度，如2% TritonX-100或2% Tween 20，并添加甘油（20%以内）以破坏非特异性相互作用。同时，提高缓冲液的盐浓度至500 mM NaCl。 4️⃣ 使用线性咪唑浓度洗脱，缓冲液B设为500mM咪唑，浓度从0-100%逐步增加，洗脱10个柱体积。 5️⃣ 增加His标签长度至7-8个组氨酸，有助于提高纯化效率。 𐟎‰ 试试这些方法，让你的His标签蛋白纯化更加纯净！

WB实验失败？5个常见原因及解决方法 1. 样品质量问题：样品蛋白质浓度过低：通常，WB实验建议加载10-30 的蛋白质。如果信号太弱，可以尝试增加样品量，但不要超过膜的承载能力。可以使用醋酸盐沉淀法或超滤浓缩法进行样品浓缩。样品蛋白质降解：使用蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂来保护样品，避免蛋白质降解。样品的处理和保存也要注意，例如快速冻存样品并在低温条件下保存。样品受到污染：确保实验过程中使用的试剂和器材干净，并进行适当的对照实验。例如，使用纯化的蛋白质作为阳性对照，同时进行阴性对照实验。蛋白质转印问题：转印条件不正确：优化电流强度、转印时间和缓冲液成分。通常，常规WB实验使用200-400 mA的电流强度，转印时间为1-2小时。优化缓冲液的成分，例如使用含有甲胺基甲酸盐（MOPS）或三甲基氨基甲酸盐（CAPS）的转印缓冲液，以提高转印效率。膜没有完全均匀湿透：使用100%甲醇浸透膜，确保膜表面均匀湿润。在转印之前，将膜放入100%甲醇中浸泡5-10分钟，然后将其转移到转印缓冲液中进行转印。抗体问题：抗体特异性不足：选择具有高特异性的抗体。可以通过文献调研、厂家推荐或其他实验室的经验来选择抗体。此外，进行充分的验证和优化，例如通过Western blot实验使用阳性和阴性对照来验证抗体的特异性。抗体效力不足：根据实验的需要，尝试使用更高浓度的抗体。通常，建议使用1:1000至1:5000的稀释倍数。也可以优化抗体结合条件，例如优化阻断剂的浓度和洗涤缓冲液的成分。阻断和洗涤条件问题：阻断剂浓度不足：增加阻断剂的浓度，通常建议使用3-5%的脱脂奶粉或1-3%的牛血清白蛋白（BSA）。优化阻断时间，通常建议阻断1-2小时。洗涤缓冲液成分不适合：优化洗涤缓冲液的成分和浓度，例如添加Tween-20或Triton X-100来增加洗涤缓冲液的洗涤效果。优化洗涤时间，通常建议进行3-5次洗涤，每次洗涤5-10分钟。显色问题：显色时间过长或过短：根据实验条件和试剂的建议，控制好显色时间。通常，常规WB实验的显色时间为1-5分钟。如果信号过强，可以缩短显色时间，如果信号过弱，可以延长显色时间。在实际操作中，还需要根据具体实验条件和样品特性进行进一步的优化和调整。

BCA蛋白浓度测定法：从原理到操作步骤 𐟌ˆ 原理： BCA蛋白浓度测定法是基于改良的Lowry法，利用二喹啉酸（bicinchoninic acid）作为反应剂。这个方法结合了双缩脲反应和显色反应：在碱性介质中，蛋白质将Cu2+还原成Cu1+，然后使用含有二喹啉甲酸（BCA）的独特试剂，通过比色法检测Cu1+，具有高灵敏度和高选择性。显色物质是由两分子的BCA和一分子的亚铜离子螯合形成的紫色物质。 𐟌Ÿ 特点：优点：灵敏度高：检测浓度下限达到10/ml，最小检测蛋白量达到0.2，待测样品体积为1-20。操作简便：在碱性溶液中BCA比Folin试剂稳定，只需一种试剂即可完成检测。兼容性强：测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween-20，60，80。线性范围广：在20-1000/ml浓度范围内有良好的线性关系。显色速度快：相同的样品孵育较短时间即可进行吸光度测定。缺点：容易受到能与铜离子反应的螯合剂，例如EDTA，巯基乙醇以及蛋白质内半胱氨酸等的影响。 𐟓 步骤（视试剂盒而定）： 1️⃣ 蛋白标准品配制：室温完全溶解蛋白标准品，取20⵬ 5mg/ml BSA蛋白标准溶液用PBS溶液稀释至100⵬，使其终浓度为1.0 mg/ml。 2️⃣ 配制BSA标准测定溶液。 3️⃣ 工作液配制：将A液与B液按照50:1的比例混合，配成BCA工作液，并混匀。 4️⃣ 加样：将待测样本以适当体积加入并用PBS补足至20ul。 5️⃣ 孵育：向各孔中加入200⵬的工作液，混匀后37℃孵育30min，亦可室温放置2h。 6️⃣ 测定吸光度：测定562nm处的吸光度，记录数值，代入标曲计算浓度。 7️⃣ 绘制标准曲线计算样品浓度：新建一个Excel表格，将得到的标准品的吸光度按照下方表格排列，并按照试剂说明说输入相应标准品的浓度。选中标准品吸光度和浓度，点击“插入”，选择散点图。点击散点图的任意一点，右键选择添加趋势线；点击设置，趋势线选项选择“线性”，勾选“显示公式”和“显示R平方值”，即可得到标准曲线。计算样本浓度：代入公式直接计算即可，但要记得样本稀释倍数再回算回去。 𐟔 通过这些步骤，你可以准确地测定蛋白质的浓度，为后续的实验提供可靠的数据支持。

pulldown结果怎么看 𐟔 GST-pull down实验是探索蛋白质间相互作用的重要方法，但进行时可能会遇到一些挑战。以下是针对常见问题的详细解答： 1️⃣ 𐟤” GST-pull down的优缺点是什么？ 𐟑 高灵敏度、高特异性，且检测范围广泛，操作简单经济。 𐟑Ž 但对于低含量抗原检测可能存在误差，且无法直接检测蛋白质结构和功能。 2️⃣ 𐟤𗢀♀️ 如何减少假阳性结果？ 𐟒ᠩ€š过添加非离子型洗涤剂和特定pH缓冲液来减少非特异性互作，并用Tween-20处理GST-beads。 3️⃣ 𐟤” 如何选择合适的阴性对照组？ 𐟒ᠩ€‰择不含目的蛋白的空GST蛋白作为对照组，以评估GST beads的特异性和排除假阳性。 4️⃣ 𐟌᯸ GST-pull down的温度和时间如何选择？ 𐟒ᠩ€š常在4℃下进行，时间为2-4小时，但具体条件可能因实验而异。 5️⃣ 𐟤” co-IP能验证互作，为何GST-pull down不能？ 𐟒ᠣo-IP在体内检测，可能捕捉到间接互作，而GST-pull down只能验证直接互作。

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